収縮運動実験では、 Xenopus胚のコホートに、標準プロトコルを使用して4細胞段階で2つの合成mRNAの1つをマイクロインジェクションし た( 32 )。
? ry )および多毛細胞 ry )のm ry 。
蛍光系統トレーサーtdTomato( 34 )と、多毛細胞阻害剤Notch ICD(20、35)と、のmRNAは、mMESSAGE転写キット(ThermoFisher Scientific、AM1340)を使用して合成 。
? 4%の細胞すべてに各 ry 。
細胞 4 個全てに各転写産物の370 pgのmRNAを送達 ために、プルキャピラリーを使用して3%Ficoll溶液で注入 。
tdTomato マイクロインジェクション胚は22°Cで飼育 、Notch ICDインジェクション胚は14°C 。
? ry MMRを含む1% ry 動物のキャ を手で ry 。
注入の24時間後、ステージ10 Notch ICD注入胚を、0.75×MMRを収容している 1%アガロース被覆ペトリ皿に移し、上記のように手術用鉗子を使用して動物キャ を手動で切断 。
さらに、ステージ2324のtdTomatoを注入した胚を同じ皿に移し、外胚葉の外層で推定心臓領域を切除 後、取り出し 棄
? ry 、3つの層を22℃で1時間回復させ た。
次に、2つのNotch ICD注入動物キャ の間に推定心臓組織を配置し、そして 22 ℃での 1 時間のヒーリングをその 3 層は許容され た。
? 治癒後、0.75 ry 5 lを含む1%アガロースでコーティングされた皿に組織を移し、14°Cで上昇させ た。
0.75×MMR 10 mLとゲンタマイシン5 μlを収容している 1%アガロースでコーティングされた皿に、治癒後の組織を移し、14℃で育て た。
? ry sculpted as above using a combination of microsurgery forceps and a MC-2010 microcautery instrument.
整形のために、得られた組織は、顕微手術鉗子とMC-2010顕微焼ca器の組み合わ 使用して上記のように彫刻された。

 

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