? 受精したX. laevisの卵 ry NieuwkoopおよびFaber( 32、33 )に従って段階化した。
アフリカツメガエル受精卵を、標準プロトコルを使用して0.1x、pH 7.8のMarc's Modified Ringers溶液(MMR)で飼育し、Nieuwkoop and Faber( 32、33 )に従ってステージングした。
? ry キャップを ry ムおよびマ ムを含まない培地に ry 。
成形実験のために、手術用鉗子を使用して動物のキャップ ( ? 訳注 : 動物極キャップ アニマルキャップ ) をSt. 9で手作業で切断し(Dumont、11241-30#4)、カルシウムとマグネシウムとが含まれない培地、に5分間移し た(
50.3 mM NaCl、0.7 mM KCl、9.2 mM Na 2 HPO 4、0.9 mM KH 2 PO 4、2.4 mM NaHCO 3、1.0 mMエデト酸[EDTA]、pH 7.3)
? 外側の外胚葉層は手 ry 、内側の層は完全に解離 ry はほぼ多能性 ry 。
外胚葉に於ける外側層を手作業で取り外して廃棄し、同内側層を完全解離するまで攪拌し た(この段階では細胞は主に多能性ですが、さらなる介入なしで外胚葉に分化します)
? 5つの動物のキャ ry 。
5つのアニマルキャップからの材料をプールし、0.75×MMRを含むウェルディッシュ ( 訳注 : 細胞培養ディッシュ ? ) に移し た。
? ry と5 l ry )を含む清潔 ry 。
14°Cで24時間後、球状の再凝集体を、10 mL 0.75X MMRとゲンタマイシン(ThermoFisher Scientific、15710072) 5 μl とを収容している清潔な1%アガロース被覆皿に移し た。
? ry (現在、イオノサイト、小 ry 胞、杯細胞を ry は、13μmのMC ry マイクロ焼uter器とマイクロ ry 鉗子の組み合わせ ry して成形されましたワイヤ電極( ry ップ焼uter電極)。
組織再凝集の48時間後、得られた組織(今や、イオノサイトと、小さな分泌細胞と、杯細胞と、を含む特定の表皮細胞系統になるよう運命づけられています)は、マイクロサージェリー鉗子と、 13μmワイヤ電極(
Protech International Inc.、MC-2010、13-Y1ワイヤチップ焼灼針 ( ? ) )のMC-2010マイクロ焼灼器 ( ? ) と、の組合せを使用してシェイプアップされ た。
? 必要な解剖 ry 時間整 ry MMRと5 lゲンタマイシンを含むきれい ry 14°Cで上昇させ た。
望ましい解剖学的結果を得るために必要に応じて組織を3時間再整形し、その後、10 mL 0.75×MMRとゲンタマイシン 5 μl とを収容しているきれいな1%アガロース被覆皿に移し、14℃で育て た。